УДК 612.39:613.26

ПРОБІОТИКИ В МЕДИЧНІЙ ПРАКТИЦІ

П.О. Карпенко, доктор мед. наук, В.В. Вознюк, Н.О. Мельничук,
Н.К. Коваленко, член.-кор. НАН України, проф., доктор біол. наук, О.А. Полтавська

Інститут екогігієни і токсикології ім. Л.І. Медведя
Інститут мікробіології та вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України

SUMMARY. Probiotics products are widely used as a meal healthy people and as dietary for different illness. Now in Ukraine a plenty of milk products, which under the application of the manufacturers, positively influence on a condition of microorganisms of the man. However not always these statements are confirmed clinical. In work the results of application product "Actimel" ("Danone", France) practically by healthy people and patients with different somatic pathology are submitted.

Організм людини і оточуюче його середовище перебувають у постійній взаємодії. Зміни, що відбуваються в навколишньому середовищі, впливають на його макро- і мікросистеми. Початок ХХІ століття характеризується різким погіршенням екологічного стану, ростом стресових чинників, антропогенних навантажень на організм людини, що здійснює негативний вплив на стан здоров'я населення України в цілому. У результаті чого відбувається зниження імунного статусу та збільшення частоти виникнення дисбактеріозів у людей різних вікових груп.

Фундаментальними і прикладними дослідженнями вчених різних країн світу показана визначальна роль для стану здоров'я людини представників корисної мікрофлори кишечника — молочнокислих бактерій і біфідобактерій [1, 2]. Ці групи мікроорганізмів входять до складу пробіотиків. Особливу увагу дослідників привертає вивчення продуктів з використанням молочнокислих бактерій з метою підтримки нормального мікробіоценозу кишечника та профілактики дисбактеріозів.

В останні роки значне місце відводиться розробці нових видів кисломолочних продуктів, які позитивно впливають на організм людини. Виробництво таких продуктів базується на удосконаленні біотехнологічних процесів з використанням традиційних штамів молочнокислих бактерій, отриманих за допомогою методів селекції, а також — розробка нового покоління кисломолочних продуктів із застосуванням нових видів мікроорганізмів з пробіотичними властивостями. Ця продукція є найперспективнішою на міжнародному ринку, і увага вчених-практиків до розширення її діапазону не зменшується. Кисломолочні біопродукти являють собою нову генерацію молочних продуктів, склад яких поступово ускладнюється, вони стають багатокомпонентними і мають певні задані біологічні властивості [2, 3, 4, 5, 6].

Постановка проблеми: у зв'язку з широким асортиментом вітчизняної та зарубіжної кисломолочної продукції, яка ніби має пробіотичні властивості, виникає питання, чи підтверджується це результатами клінічних досліджень.

Компанія "Данон" розробила оригінальний кисломолочний продукт "Actimel", який успішно реалізується в багатьох країнах світу, в тому числі і в Україні. Даний продукт містить традиційні йогуртові культури Lactobacillus subsp. bulgaricus, Streptococcus salivarius subsp. thermophilus, а також особливу пробіотичну культуру Lactobacillus casei DN-114001 (комерційна назва Lactobacillus casei Defensis). Штам L. casei Defensis завдяки своїм пробіотичним властивостям сприяє оптимізації бар'єрної функції мікрофлори товстої кишки, профілактиці ряду захворювань шлунково-кишкового тракту серед різних вікових груп населення.

Мета дослідження: дослідити пробіотичні властивості та ефективність кисломолочного продукту "Actimel" при споживанні його практично здоровими особами та пацієнтами з різною соматичною патологією в стадії ремісії.

Матеріали та методи дослідження: визначали вплив продукту на загальний стан здоров'я та мікробний біоценоз кишечника осіб дослідної та контрольної груп. Роботу проводили спільно з консультативно-контрольною лабораторію Інституту мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України під керівництвом член-кор. НАН України проф. Н.К. Коваленко.

Попередньо був визначений кількісний склад молочнокислих бактерій у продукті "Actimel". Дослідженню піддавали три зразки. Посів проводили за відповідною методикою для виділення молочних стрептококів і лактобацил.

Число молочнокислих бактерій, виявлене в 1 мл продукту, подане в табл..

Кількісне і якісне дослідження мікрофлори кишечника проводили відповідно до Методичних рекомендацій МОЗ [7, 8 ].

Посів досліджуваного матеріалу з різноманітних разведень здійснювали на таких живильних середовищах:

Для виділення лактобактерій використовували середовище МРС-бульон і МРС-агар ("Difco"); молочнокислих стрептококів — середовище М-17 (бульйон і агар фірми "Merk"), біфідобактерії виділяли на "середовищі для біфідобактерій" фірми "Кали"; мікроорганізми групи E. coli виділяли на середовищі Ендо ("Merk"), гемолітичні форми — на базовому кров'яному агарі ("Merk"), лактозонегативні — на бромтімоловому лактозному агарі ("Merk"). Для виділення стафілококів використовували стафілококовий агар ("Difco" США), на середовищі Сабуро ("Difco") виділяли дріжджоподібні гриби роду Candida. Бактерії, що утворюють спори, виділяли на м'ясо-пептонному агарі після прогрівання разведень у фізіологічному розчині при 80°С протягом 20 хвилин. Бактерії роду Proteus виділяли на скошеному м'ясо-пептонному агарі ("Merk"), проводячи посів клітин у конденсат.

Кількісний підрахунок бактерій виражали у вигляді об'єктивної кількості підрахованих колоній, помноженої на число разведень (наприклад, 1,3•10⁴ КУО/г).

Об'єкт дослідження: враховуючи, що "Actimel" призначений для реалізації через торгову мережу для широкого загалу населення, особливістю даного дослідження був нецілеспрямований відбір осіб основної групи спостереження. При цьому особи дослідної групи не змінювали свій традиційний раціон і режим харчування. Попередньо при відборі осіб дослідної групи не акцентувалося питання щодо стану мікробіоценозу кишечника (наявність чи відсутність явищ дисбактеріозу, тощо). У той же час, перед вживанням продукту, була досліджена кількість мікроорганізмів різних таксономічних груп, що містяться у дистальному відділі кишечнику дослідженої групи пацієнтів.

Першу досліджувану групу становили 20 осіб, другу — контрольну — 5. Серед осіб першої групи 10 осіб (50%) були практично здоровими та 10 осіб (50%) мали різні соматичні захворювання в стадії ремісії. Крім того, в першій групі виділено 6 осіб, які протягом 6 місяців до початку дослідження мали схильність до запорів: на фоні різної соматичної патології (4 особи) та 2 практично здорові особи.

При споживанні продукту особи дослідної групи не отримували медикаментозного лікування, ферментних препаратів та не змінювали свої звичні раціони харчування. У контрольній групі 2 особи відзначали схильність до запорів.

Спосіб споживання продукту: продукт "Actimel" був рекомендований для доповнення раціонів харчування по 100 мл 2 рази на день під час споживання їжі протягом 25 днів.

Результати досліджень. Оцінка ефективності продукту здійснювалась за суб'єктивними (анамнез, органолептична характеристика "Actimel", дані анкетного опитування) та об'єктивними показниками (дані лабораторних досліджень), а також за показниками даних мікробіологічних досліджень мікрофлори кишечника.

При органолептичній оцінці продукту всі пацієнти дослідної групи відзначали його високі смакові властивості, продукт отримав оцінку "п'ять" балів за п'ятибальною шкалою, причому більшість пацієнтів суб'єктивно характеризували "Actimel" як продукт спеціального призначення.

Кисломолочний продукт "Actimel" рекомендується для повсякденного вживання широким верствам населення, тому до осіб, яких включали до складу дослідної групи, не ставилися вимоги зміни раціонів звичного харчування. Харчування дослідної та контрольної груп здійснювалося в домашніх умовах. При вживанні продукту "Actimel" особи дослідної групи свій режим харчування, смакові звички, особливості раціонів не змінювали. Режим харчування дослідної групи осіб характеризувався нерегулярністю. Протягом дня вони вживали їжу 2—5 разів. Найбільш енергетичноємним був вечірній прийом їжі у 45% осіб, перший прийом їжі — у 15% осіб, обідній (14⁰⁰—17⁰⁰) — у 44%. Періоди між споживанням їжі становили від 4 до 6 годин. На фоні нераціонального харчування особи дослідної групи періодично вживали значну кількість жирної, гострої, смаженої та копченої їжі.

Асортимент харчових продуктів дослідної групи осіб містив незначну кількість страв із риби, сиру, молока та кисломолочних продуктів. Враховуючи літньо-осінній період року, у 60% пацієнтів (в основному жінки) в раціонах кількість м'ясних страв не досягала 100 г. Для чоловіків було характерним включення до раціону харчування більшої кількості м'ясних страв (що містили до 150—250 г). Вживання натуральних соків, особливо з вмістом пектинових речовин, а також мінеральної води було досить обмежене у всіх пацієнтів. У спожитих раціонах переважали смажені, тушковані страви, а також сосиски, сардельки, значно менша кількість страв була в паровому вигляді.

Після споживання продукту "Actimel" 6 осіб дослідної групи відзначали поліпшення загального стану організму, підвищення працездатності, у них поліпшилась перетравність жирної їжі. Особливістю харчових раціонів даної групи осіб, враховуючи сезон року, було включення до їх складу грубої рослинної їжі у кількостях, що перевищують рекомендовані (до 400—500 г), та споживання до 200—300 г баштанних культур (кавуни, дині). До цього 6 осіб дослідної групи при вживанні цих рослинних продуктів у сирому вигляді періодично відзначали явища метеоризму, відчуття урчання у кишечнику. Після включення в раціони харчування продукту "Actimel" у 3 осіб ці явища вже не спостерігалися.

Необхідно відзначити, що позитивні зміни в організмі відбувалися поступово, через 1—2 тижня після вживання продукту "Actimel". Виявлено тенденцію до нормалізації роботи шлунково-кишкового тракту, а саме: у 6 осіб основної групи первинно спостерігалась схильність до запорів, а після вживання продукту у 3 осіб нормалізувалась моторна функція кишечника, став більш регулярний режим дефекації (переважно вранці); налагодилось формування відповідної консистенції калових мас; зменшились неприємні відчуття при дефекації.

При вживанні продукту "Actimel" впливу на показники периферичної крові, біохімічні показники, загальний аналіз сечі не спостерігалося.

Серед осіб контрольної групи суттєвих змін в клінічних показниках не відзначено.

Дослідження мікробного біоценозу дистального відділу кишкового тракту.

Практично здорові пацієнти.

Групу практично здорових пацієнтів, що вживали "Actimel", становили 10 чоловік. У 80% із них (підгрупа 1) вік був у межах 24—28 років, два чоловіки — 20% (підгрупа 2) мали вік 32 і 37 років. Пацієнти, що брали участь у дослідженні, перебували на звичному для них раціоні харчування і додатково приймали "Actimel".

Підгрупа 1 (вік 24—28 років). При дослідженні складу мікрофлори дистального відділу кишечника пацієнтів цієї підгрупи виявилося, що в 50% (4 особи) кількість молочнокислих бактерій не змінилася в процесі досліду. У інших 50% (4 особи) кількість цих мікроорганізмів збільшилася на один-два порядки.

Число кокових (стрептококи) і паличкоподібних форм (лактобацили) у досліджуваному матеріалі становило до прийому "Actimel" — 10⁷—10⁸ КУО/г, а після нього — 10⁸—10¹⁰ КУО/г.

Кількість біфідобактерій не змінювалась у процесі досліджень у 4 пацієнтів (50%) і знаходилася в межах 10⁹ КУО/г. У одного пацієнта (12,5%) кількість біфідобактерій в 1 г фекалій знизилася на два порядки: 3,1•10⁹ на початку досліду і 1,9•10⁷ після його закінчення. У трьох пацієнтів (37,5%) число біфідобактерій у вмісті кишечника зросло в сто і тисячу разів (від 10⁶—10⁷ до 10⁹ КУО/г).

Кількість кишкової палички не змінилася у 62,5% (5 чол.) і коливалося в межах 10⁷—10⁹  КУО/г.

У трьох пацієнтів (37,5%) число цих бактерій знизилося і прийшло до норми: від 10¹⁰ до 10⁷ КУО/г.

При цьому зменшилася кількість або зовсім зникли лактозонегативні форми кишкової палички, тобто "Actimel" пригнічував ріст гемолітичних форм цих мікроорганізмів.

Підгрупа 2 (вік 32 і 37 років) — 2 практично здорові особи. У пацієнта №12 (32 роки) у біоценозі кишечника були взагалі відсутні лактобацили на початку спостереження і по його закінченні. У той же час, у нього ж по закінченню спостереження зменшилася кількість лактозонегативної кишкової палички.

У другого пацієнта №15 (37 років) явище дисбактеріозу не спостерігалося і кількість корисної мікрофлори — молочнокислих бактерій і біфідобактерій — не змінилася і становила 1,0&@149;10⁹ КУО/г.

Таким чином, у групі практично здорових пацієнтів ми також спостерігали тенденцію поліпшення складу мікробного біоценозу кишечника під впливом пробіотичного продукту "Actimel".

Пацієнти, що страждають різноманітними формами патології шлунково-кишкового тракту.

Цю групу сформовано з 8 пацієнтів: два із них віком 26 і 27 років (25%), два — у віці 34 років (25%) і чотири пацієнта (50%) у віці від 44 до 45 років.

Підгрупа 1. (вік 26—27 років). У цих пацієнтів чітко проявилася тенденція нормалізації мікробіоценозу дистального відділу кишечника. Кількість молочнокислих бактерій не змінювалася протягом усього часу спостереження, у той же час у пацієнта №1 кількість кокових форм (стрептококи, лактококи) збільшилася на 4 порядки: від 5,0•10⁵ до 6,0•10⁹ КУО/г. Нормалізувалась і кількість кишкової палички, а в пацієнта №1 на два порядки зменшилася кількість гемолітичних і лактозонегативних форм. Зникли умовно-патогенні ентеробактерії, кількість яких реєструвалася 2,0•10⁴ КУО/г до початку вживання "Actimel".

Підгрупа 2. (вік від 27 до 34 років). У даній підгрупі було 2 пацієнти. У них число молочнокислих бактерій і біфідобактерій у вмісті кишечника збільшилося на один-два порядку і становила 10⁸—10⁹ КУО/г. А у пацієнта №12 лактобацили, що не реєструвалися до початку дослідження, вживання продукту "Actimel" пригнітило ріст гемолітичної та лактозонегативної кишкової палички.

Підгрупа 3 (вік 44—45 років). У пацієнтів цієї підгрупи найбільш активно проявився позитивний вплив продукту "Actimel" на нормалізацію складу мікрофлори дистального відділу кишкового тракту. У 50% пацієнтів кількість лактобацил збільшилася від 106—107 до 109 КУО/г. Залишилась незмінною або на порядок збільшилася кількість біфідобактерій. А у пацієнта №11 ці бактерії, що не реєструвалися до вживання продукту "Actimel", з'явилися у фекаліях у кількості 1,6•109 КУО/г. У пацієнта №9 були виявлені до початку спостереження ентеропатогенні мікроорганізми, але вони не виявлялись в кишковому вмісті після закінчення вживання продукту.

Таким чином, кисломолочний продукт "Actimel", що має пробіотичні властивості, виявився найбільш ефективним для людей із проявом дисбактеріозу кишечника.

Пацієнти контрольної групи.

У контрольну групу пацієнтів, що не вживали пробіотичний продукт "Actimel", увійшло 5 осіб: 2 — практично здорових (40%), один із патологією шлунково-кишкового тракту (20%) і 2 особи із серцево-судинною патологією (40%). Зміни в складі мікрофлори кишечника цієї групи пацієнтів були незначними і залежали від раціону харчування кожного з них протягом усього часу спостереження.

Таким чином, продукт "Actimel" слід розглядати як складову частину раціонів харчування не лише здорових, а й осіб з різною соматичною патологією. Особи, що вживали "Actimel", відзначали його високі смакові властивості, а сам продукт характеризувався доброю переносимістю, відсутністю побічних та алергічних реакцій. Позитивний вплив продукту "Actimel" більш ефективний при включенні його до незбалансованих раціонів харчування, при надлишку в них тваринних білків, недостатності молочних продуктів.

При включенні в раціони харчування продукту "Actimel" необхідно звертати увагу на стан харчування даної особи, враховувати його смакові звички, характер трудової діяльності, вплив несприятливих чинників оточуючого середовища.

При використані продукту "Actimel" в раціонах різних вікових груп рекомендовано диференційований підхід до його споживання. Так, при вживанні продукту "Actimel" з профілактичною метою на фоні збалансованого харчування, доцільним буде включення його в добові раціони в кількості 100 мл щоденно, а для осіб з різною соматичною патологією бажано вживати "Actimel" по 200—300 мл щоденно.

Вживання продукту "Actimel", що має пробіотичні властивості, виявилося найбільш ефективним для людей із проявом дисбактеріозу кишечника, який має місце як при різних соматичних захворюваннях, а також і у практично здорових осіб. Враховуючи отримані результати, а також дослідження, проведені виробником продукту "Actimel", доцільним буде включення його у склад дієтичного харчування: дієт №1, 1б, 3 (у дозах 200—300 мл), 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, а також до складу розвантажувальних дієт. Даний продукт позитивно сприймається пацієнтами, органічно входить в їхні звичні раціони харчування та не викликає негативних емоцій при тривалому вживанні.

Література
1. Fuller R. Probiotics in man and animals // J. Appl. Bacteriol. —1989. —66. —C. 365—378.
2. Смирнов В.В., Коваленко Н.К., Подгорский В.С., Сорокулова И.Б. Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов // Микробіол. журн. —2002. —Т. 64, №4. —С. 62—81.
3. Липатов Н.Н. Основополагающие понятия экологии питания // Молоч. пром-сть. —2003. —№2 (5). —С. 18—19.
4. Чагаровский А.П. Пробиотические культуры компании "Chr. Hansen" для производства молочной продукции // Молоч. пром-сть. 2003. —№2(5). —С. 8—12.
5. Microbiology Manual. Цит. по: Langmann H.J. et al. 1996. —5.1. —V.2. —52 p.
6. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology // Baltimore. —1986. —vol.2. —P. 1418—1434.
7. Харченко Н.В., Черненко В.В. Современные подходы к коррекции дисбактериоза кишечника // Метод. рек. МЗ Украины. —К., 2000. —28 с.
8. Лисенко Г.І., Білко І.П., Нікольська О.І. та ін. Діагностика та лікування дисбактеріозу кишечнику у ревматологічних хворих // Метод. рек. МОЗ України. —К. "Знання", 1999. —22 с.