|
МЕХАНІЗМИ ІНТОКСИКАЦІЙ УДК 577.152.173/6/199.1/175.64 СОДЕРЖАНИЕ НЕКОТОРЫХ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ, ПРОДУКТОВ КАТАБОЛИЗМА ПУРИНОВ И АЭРОБНОГО ОКИСЛЕНИЯ NO В ПЛАЗМЕ КРОВИ ДЕВУШЕК, ПРОЖИВАЮЩИХ В РЕГИОНАХ, ЗАГРЯЗНЕННЫХ ПОЛИХЛОРБИФЕНИЛАМИВ.В. Сумбаев, к.б.н., И.М. Ясинская, Е.О. Воскресенская Одесский национальный университет им. И.И. Мечникова, В настоящее время более 100 соединений, присутствующих в окружающей среде, отнесены к разряду токсикантов эндокринной системы или так называемых эндокринных "дизрупторов". Среди этих соединений наиболее распространены ксеноэстрогены — полихлорированные бифенилы, полихлордибензодиоксины и полихлордибензофураны [1], обладающие эстрогенной активностью и являющиеся промоторами канцерогенеза. Установлено, что они индуцируют биосинтез изоформ 1А1, 1А2 и 1В1 цитохрома Р450 взаимодействуя с Аh-рецепторами (aromatic hydrocarbone) и активируя экспрессию соответствующих генов. Комплекс Аh-рецептор — лиганд частично фосфорилируется протеинкиназой С и приобретает митогенную активность [2]. С другой стороны, данные вещества ингибируют апоптоз клеток, тормозя образование его индукторов — супероксида и оксида азота [2—4]. Достигается это путем аллостерического ингибирования ксантиноксидазы (КФ: 1.2.3.2), превращающей гипоксантин в ксантин и далее в мочевую кислоту и являющейся главной системой генерирования супероксидных радикалов, а также ингибирования активности синтазы оксида азота (КФ: 1.14.13.19), превращающей аргинин в цитруллин с отщеплением NO [5—7]. В последнее время показано, что ксеноэстрогены ингибируют активность и экспрессию гена цитохрома Р450 XIXA1 ароматазы, превращающего андростендион и тестостерон в эстрон и эстрадиол, соответственно [8]. Кроме того, данные соединения ингибируют взаимодействие глюкокортикоидов с рецепторами [9]. На территории Украины существуют регионы, в значительной степени загрязненные ксеноэстрогенами, например, Сарата. В питьевой воде, коровьем молоке, растительных продуктах питания этого региона обнаружены относительно высокие концентрации дихлордифенилтрихлорэтана (ДДТ), дихлордифенилдихлорэтана (ДДД), дихлордифенилдихлорэтилена (ДДЕ), нитрофена и каратана. Целью настоящей работы явилось определение содержания глюкокортикоидов, тестостерона, эстрогенов, мочевой кислоты, ксантина и продуктов аэробного окисления оксида азота в плазме крови девушек, проживающих в Сарате, и активности цитохрома Р450 ароматазы в плаценте женщин, проживающих в Сарате. Материалы и методы исследования В эксперименте были задействованы 10 девушек 12–18 лет (две — 12–14 лет, три — 14–16 лет, четыре — 16–18 лет). Контрольную группу составили 10 девушек того же возраста, проживающих в Одессе. У всех испытуемых проводили забор крови из вены в период овуляции (середина менструального цикла) в условиях стационара кафедры акушерства и гинекологии Одесского государственного медицинского университета. О количестве глюкокортикоидов судили по содержанию в сыворотке крови 17-оксикортикостероидов, которое определяли по методике [10, 11]. Эстрогены (сумма концентраций эстрона, эстрадиола и эстриола) определяли спектрофотометрическим методом [12]. О количестве секретируемого прогестерона (предшественник кортикоидов, андрогенов и эстрогенов) судили по содержанию его гексагидропроизводного — прегнандиола, которое определяли спектрофотометрически [12]. Тестостерон изучали методом тонкослойной хроматографии на пластинках Silufol UV 254. Хроматографирование производили в системе Буша (метанол:бензол:ледяная уксусная кислота — 1:2:1). Хроматограммы проявляли 0,2 % раствором синего тетразолового в 7 % NaOH (тестостерон восстанавливает синий тетразоловый в бисформазан, имеющий максимум поглощения 525 нм) [13]. Концентрацию мочевой кислоты определяли унифицированным методом Фолина [14]. Содержание ксантина (предшественник мочевой кислоты) определяли методом тонкослойной хроматографии [15]. Количество продуктов аэробного окисления оксида азота определяли спектрофотометрическим методом, основанном на реакции Грисса [16]. Для исследования активности цитохрома Р450 ароматазы в условиях загрязнения ксеноэстрогенами использовали плаценту 5 женщин в возрасте 18–25 лет, проживающих в Сарате, и пяти женщин того же возраста, проживающих в Одессе. Материал был любезно предоставлен кафедрой акушерства и гинекологии Одесского государственного медицинского университета. Плаценту гомогенизировали в 0,25 М сахарозе в соотношении 1:5 и определяли активность ароматазы описанным нами методом, основанном на регистрации количества НАДФН+Н+, окисляемого ферментом в течение 1 мин на 1 мг белка в присутствии субстрата — тестостерона [17, 18]. Статистическую обработку результатов исследований проводили в соответствии с t-критерием Стьюдента [19]. Результаты и их обсуждение Установлено, что содержание свободных 17-оксикортикостероидов в плазме крови девушек, проживающих в Сарате, достоверно повышено по сравнению с контрольной группой (табл. 1). Данный результат можно объяснить ингибированием связывания глюкокортикоидов с рецепторами. В этих условиях, как было ранее показано, наблюдается увеличение содержания свободных глюкокортикоидов [9] и, возможно, их гиперсинтез. Этому соответствует достоверное снижение содержания прегнандиола (табл. 2) в группе девушек, проживающих в Сарате. У них же обнаружено достоверное снижение содержания эстрогенов и повышение содержания тестостерона в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой (табл. 1), что косвенно свидетельствует об ингибировании ароматазы токсикантами. Этому соответстует достоверное снижение ароматазной активности в плаценте женщин, проживающих в Сарате по сравнению с контрольной группой (рисунок). Как нами ранее было установлено, ксеноэстрогены ингибируют ароматазную активность и тормозят экспрессию ее гена [8]. В сыворотке крови девушек, проживающих в Сарате, содержание мочевой кислоты было достоверно снижено, а ксантина — достоверно повышено по сравнению с контрольной группой (табл. 2), что свидетельствует об ингибировании ксантиноксидазной активности [20] в организме. Концентрация продуктов аэробного окисления NO в сыворотке крови испытуемых из Сараты достоверно ниже, чем в контрольной группе, что может являться результатом уменьшения NO-синтазной активности. Полученные результаты свидетельствуют, что в условиях загрязнения ксеноэстрогенами наблюдаются нарушения биосинтеза эстрогенов, повышается содержание глюкокортикоидов. Кроме того, снижается активность ксантиноксидазы и синтазы оксида азота, что может быть причиной ингибирования апоптоза клеток и увеличивает риск онкологических заболеваний. Торможение биосинтеза эстрогенов может, в свою очередь, привести к развитию синдрома маскулинизации и увеличивает риск бесплодия. Литература |